常用的基因突变检测方法有哪些,关于454焦磷酸测序的原理问题

1、常用的基因突变检测方法有哪些

1、焦磷酸测序法 测序法的基本原理是双脱氧终止法，是进行基因突变检测的可靠方法，也是使用最多的方法。但其过程繁琐、耗时长，灵敏度不高，对环境和操作者有危害，故在临床应用中存在1定的限制。 焦磷酸测序法适于对已知的短序列的测序分析，其可重复性和精确性能与SangerDNA测序法相媲美，而速度却大大的提高。 焦磷酸测序技术产品具备同时对大量样品进行测序分析的能力。为大通量、低成本、适时、快速、直观地进行单核苷酸多态性研究和临床检验提供了非常理想的技术操作平台。

2、微数字聚合酶链反应 该方法为将样品作大倍数稀释和细分，。

2、关于454焦磷酸测序的原理问题

1，对高通量测序来说，如果是测基因组相当于做鸟枪库测序，而不是针对特定位置来测得。 2，无法保证。所以实际上每次测1个基因组，其实要获得测至少6倍以上基因组大小的数据。通过过量的数据来拼接，最后再把仍然没解决的gap用1代测序cover掉。 3，理论上，是这样。1个接1个的进入。 4，我忘记454是几色萤光了。应该是单色，还需加入洗涤同步的时间，要远大于4at。ngs快不是指并不是每个循环快，而是每次获得的信息量大。ngs每次跑的时间要数倍于1代测序，但是获得的信息量要千倍于1代测序。如果想要大量数据，自然是ngs快的多。说它价钱便宜也是同样道理。

3、dna提取，引物设计，its测序整个流程下来1个样多少

dna提取，引物设计，its测序整个流程下来1个样多少钱 高通量测序技术（High-throughput sequencing）又称“下1代”测序技术（Next-generation sequencing technology），以能1次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定和1般读长较短等为标志。 根据发展历史、影响力、测序原理和技术不同等，主要有以下几种：大规模平行签名测序（Massively Parallel Signature Sequencing, MPSS)、聚合酶克隆（Polony Sequencing）、454焦磷酸测序（454 pyrosequencing）、Illumina (Solexa) sequencing、ABI。

4、【临检杂谈】---临床检测，到底该选PCR还是NGS？(1

1985年，美国人凯利·穆利斯开创了聚合酶链式反应，也就是PCR，用来快速富集DNA。这1天才idea从诞生之日，便改变了整个分子生物学的发展进程。“设计引物→提取核酸→上机扩增→跑胶”，成了众多生物科研狗的日常。分子生物学甚至因此被称之为“凝胶上的科学”。 基于PCR开发的技术，包括RT-PCR、ddPCR、光PCR等等，正在全世界无数的实验室帮助科研人员理解、挖掘分子层面的生物学奥秘。比如目前最常用7500，无论是高校、医院、第3方检测机构，基本都用得到它。 花开两朵，各表1枝，测序技术的发展要比PCR坎坷很多。 NGS，即Next Generatio。

5、【现学现卖】实验-DNA测序（第1代至第3代）

测序，简单来说就是将DNA化学信号转变为计算机可处理的数字信号。 1代测序 首先讲1下测序的基础方法，Sanger测序 (Sanger et al.,1977) 1977年Frederick Sanger和同事发展出双脱氧测序法（dideoxy sequencing method）或称链终止法，并对噬菌体phiX-174测序以来，测序原理并未有太多变化。后来测序方法的改革也几乎都是在此基础上，缩短时间，降低人力，比如

1、在每1种ddNTP中掺入不同的荧光标记，使测序在单1反应中就能进行。

2、使用极薄极长的充胶玻璃毛细管代替大的聚丙烯酰胺凝胶块，新的介质散热更快，使电泳能在高压下进行，降低分离时间等诸如此类的减少。