请教pEASY-T1 simple 载体TA克隆后通用测序引物的选择,请教pEASY-T1 simple 载体TA克隆后通用测序引物的选择

请教pEASY-T1 simple 载体TA克隆后通用测序引物的选择


1、请教pEASY-T1 simple 载体TA克隆后通用测序引物的选择


使用他家试剂盒里面带的测序引物,如果你没有试剂盒里的引物,可以根据说明书里有的引物序列,自己合成,或者使用 M13-47 / RV-M / T7。



2、请教pEASY-T1 simple 载体TA克隆后通用测序引物的选择


使用他家试剂盒里面带的测序引物,如果你没有试剂盒里的引物,可以根据说明书里有推荐的引物序列,自己合成,或者使用 M13-47 / RV-M / T7。



3、有两个启动子的TA克隆载体吗


你干嘛要两个启动子。不行自己做呗。



4、什么物质能增加载体对TA片段的连接效率


可以用两种限制酶切割目的基因两端。


为了防止目的两端及载体的两端连接在1起,可以用两种限制酶切割目的基因两端,同时也用这两种限制酶切割载体,这样就能形成两种黏性末端,同时也能防止目的基因和载体的自连。



5、什么是ta载体


就是T载体。指采用突出的T末段和PCR产物中1般带有的A末段互补,从而提高重组效率的载体。常用T载体有pMD18-T载体等。



6、构建TA克隆,为什么测序结果老是空载体?


可以不同克隆到载体上。dna测序过程,其实是pcr的过程,你只要有足够的模板用于pcr反应就行,不1定要克隆到载体上。当然,大多数都是克隆到载体上,因为你需要将待测dna递交给测序公司,位于载体上的dna可以保存在细菌中,方便运输,也方便测序公司进行扩增(培养菌,提质粒就行了),有时测序是需要重测的,1次不能测完,培养细菌扩增质粒是最简单的方法。

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